-
RIP-qPCR: RNA免疫沉淀定量PCR技术
技术简介
RIP(RNA Immunoprecipitation)是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络的有力工具。这种技术运用针对目标蛋白的抗体把目标RNA结合蛋白(RBP)及其结合的RNA复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行高通量测序或PCR验证特定RNA的富集。 RIP-qPCR(RNA Immunoprecipitation-quantitative Polymerase Chain Reaction)即 RNA 免疫沉淀-定量聚合酶链反应,是一种检测细胞内蛋白-RNA相互作用的靶向验证技术。该技术联合了RIP和RT-qPCR检测技术,适用于对目的蛋白-RNA互作关系进行验证以及不同遗传背景或实验条件下的互作差异研究。RIP-qPCR可作为在RNA调控区域上找到RBP结合的直接证据,在核酸检验方面具有更强的说服力。云序生物提供RIP-seq和RIP-qPCR验证服务,结合免疫沉淀和定量PCR技术,提供最全面、最专业的注释和分析,帮助客户快速分析和验证蛋白质-RNA相互作用,以阐明其生物学机制。
RIP-qPCR方法主要包括以下步骤:
1)细胞裂解:使用温和裂解缓冲液裂解细胞,释放RNA-蛋白复合物;
2)免疫沉淀:使用抗体特异性富集目标蛋白结合的RNA片段;
3)RNA纯化:提取免疫沉淀的RNA;
4)cDNA合成:将纯化后的RNA反转录为cDNA;
5)实时定量PCR:通过qPCR定量目标RNA的富集程度。
RIP检测示意图(Martindale et al. 2020)
ChIP及后续分析流程图
-
ꁸ 回到顶部
-
ꂅ 021-64878766
-
ꀥ 微信公众号二维码

-
-
云序用户案例
案例1:NAT10对mRNA中胞苷的N4-乙酰化修饰在T细胞扩增和抗病毒免疫中的关键作用
原文:A critical role ofN4-acetylation of cytidine in mRNA by NAT10 in T cell expansion and antiviral immunity
发表时间:2025/03/05
发表期刊:Nature Immunology
影响因子:27.7
发表单位:复旦大学医学院附属中山医院&金山医院
据报道,ac4C的“writer”蛋白N-acetyltransferase 10 (NAT10),以及ac4C在维持mRNA稳定性和促进翻译效能方面有重要生物学功能。NAT10介导的ac4C修饰在多种疾病和病症中的潜在作用,如早衰、自身免疫性疾病、感染、炎症和癌症等。该研究探究了NAT10蛋白影响MYC蛋白水平的机制,通过ac4C-RIP-seq分析显示ac4C峰广泛分布在Myc mRNA区域内,并且这些峰在Nat 10缺失后均显着下调。ac4C-RIP-qPCR进一步证实Myc mRNA被ac4C修饰,借助RIP-qPCR也证明了NAT10蛋白与Myc mRNA特异性结合。这些结果表明,NAT10通过ac4C RNA修饰动态调控Myc mRNA的稳定性与翻译效率。
图1. 验证NAT10蛋白与Myc mRNA特异性结合
案例2:N-乙酰基转移酶10通过N4-乙酰胞苷修饰SLC30A9调节AMPK/mTOR信号,促进生成弥漫性大B细胞淋巴瘤
发表时间:2024/07/03
发表期刊:Clinical And Translational Medicine
影响因子:7.9
发表单位:山东省立医院
弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是一种表型和分子特征高度不均匀的淋巴瘤,它也是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)类型。研究表明,针对表观遗传多样性提供了广泛调节肿瘤细胞转录活性的可能性,并可能在治疗DLBCL中起作用。由N-乙基转移酶10(NAT 10)催化的N4-乙基胞苷(ac 4C)修饰是一种新型化学修饰,可提高翻译效率和mRNA稳定性。该研究通过RIP-qPCR表明NAT10蛋白与SLC30A9 mRNA存在显著的结合和相互作用,NAT10似乎在调节DLBCL中SLC30A9 mRNA乙酰化方面发挥重要作用。
图2. NAT10蛋白与SLC30A9 mRNA存在显著的互作关系
-
云序优势
1. 一站式服务
客户只需提供细胞或组织,云序生物为您完成从实验设计→样本处理→RIP→qPCR→数据分析整套服务流程。
2. 商业化的RIP试剂盒
RIP实验的成败是决定数据质量的关键,云序生物采用商业化RIP试剂盒,保证了RIP实验的成功率和稳定性。
3. 严格的质控
云序生物在实验的各个关键步骤加入了一系列质控点,全程监控实验质量,确保客户得到优质的数据。
4. 精准数据分析
云序生物采用Fold Enrichment进行定量分析,并使用IgG阴性对照,确保结果可靠。
云序数据分析(仅供展示 详见demo报告)
1.具体基因的qPCR
基因1 PDE3A的RIP-qPCR结果如下表所示。(示例)
2.扩增曲线
3.熔解曲线
-
样本要求:
样品类型:
细胞或组织。其它类型样品请详询。
样品量:
1)细胞:5×10^8
2)组织:500 mg
样品运输及保存:
样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。
样品保存:细胞样品或新鲜组织块液氮冻存后-80℃保存。
技术服务
Technical Service
关于我们
云序生物是国家高新技术企业及ISO9001认证单位,以RNA修饰组、表观遗传组与时空组学为特色,依托高通量测序平台,以“技术创新+全链条服务”为核心,通过专利技术应用(如GLORI)、临床微量样本技术优化及单细胞-空间多组学整合能力,持续推动表观遗传与转录组学发展。
技术服务
