上海云序生物科技有限公司-单碱基O8G RNA修饰测序（O8G miSeq）

单碱基O8G 修饰测序（O8G miSeq）技术

O8G-miseq 产品列表：

技术简介：

O8G RNA修饰

O8G RNA氧化修饰是在哺乳动物细胞内活性氧攻击mRNA中的鸟嘌呤从而产生的一种RNA修饰，它可以与腺嘌呤配对并诱导鸟嘌呤-胸腺嘧啶（G> T）突变，是病理生理学中一种通过活性氧氧化导致疾病表型的修饰。目前，O8G RNA氧化修饰作为一类新型RNA修饰，是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点和“超级潜力股”！O8G修饰可作为氧化应激的生物标志物，反映细胞内的氧化还原状态。通过检测O8G修饰水平，可以评估细胞的氧化应激程度，为疾病诊断提供依据。

O8G-miseq

2023年发表在Nature Cell Biology的“Widespread 8-oxoguanine modifications of miRNA seeds differentially regulate redox-dependent cancer development”文章揭示了O8G修饰广泛存在于 miRNA种子序列中，并参与肿瘤调控。种子区的O8G修饰可改变miRNA与mRNA的结合亲和力，进而调控基因表达。通过改变miRNA靶向性，影响下游基因表达和信号通路，例如，O8G修饰的tRF- 1- AspGTC可靶向WNT5A和CASP3的mRNA，通过BMPR2- ROS信号通路调控肺动脉高压。

云序生物O8G-miSeq单碱基检测技术基于免疫沉淀（IP）与高通量测序精准检测miRNA中O8G修饰位点及其功能影响。通过O8G特异性抗体富集修饰RNA片段，构建IP文库与Input对照文库，结合Illumina平台进行高深度测序，筛选出具有显著 O8G 修饰信号的潜在 miRNA 分子；利用富集分析和G>T突变分析定位 miRNA的具体 O8G 修饰位点，实现单碱基分辨率定位，并且明确修饰对 miRNA 靶向 mRNA 亲和力的影响。

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高分文章案例

案例1：O8G RNA氧化修饰与蛋白翻译密切相关

原文：Position-specific oxidation of miR-1 encodes cardiac hypertrophy

期刊：Nature 影响因子：64.8

韩国高丽大学Sung Wook团队在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的microRNA（miRNA）进行了特异性测序。结果发现8-氧代鸟嘌呤2（O8G）修饰是选择性地在miRNA的特殊区域（位置2-8）产生的，并通过O8G-A碱基互补配对来调节其他mRNA。用肾上腺素能激动剂治疗后主要在miR-1（7O8G-miR-1）的第7位诱导了O8G氧化修饰。单独引入的7O8G-miR-1或7U-miR-1（其中7位的G被U取代）足以引起小鼠心脏肥大，O8G-miR-1的mRNA靶基因在受影响的表型中起作用，反之对小鼠心肌细胞7O8G-miR-1的特异性抑制可减轻心脏肥大。O8G-miR-1也与心肌病患者有关。本研究表明miRNA的位置特异性氧化可以作为表观转录机制来协调病理生理学氧化还原介导的基因表达，为研究氧化修饰在病理生理学中的作用提供了新的思路。

miR-1位置特异性氧化的示意图模型

云序技术优势：

单碱基分辨率：

1.通过IP Enrichment分析，通过IP信号>Input信号筛选潜在O8G-miRNA

2.通过G>T突变分析，确定O8G-miRNA及具体修饰位点，并对发生O8G前后miRNA进行靶基因分析

一站式服务：

客户只需提供组织、细胞、全血样品或RNA，云序生物为您完成O8G-miseq全套实验服务。

专业的生物信息学分析：

云序生物拥有专业的生物信息分析团队，帮助客户进行实验数据的全面挖掘。

样本要求：

样品类型： 细胞、新鲜组织或RNA样品。其它类型样品请详询。

样品量：

a) 细胞：> 2×10^7

b) 组织：> 200 mg

c) RNA：2 μg -300 μg（推荐>30 μg）浓度≥ 100 ng/μl d)

体液：全血> 5 ml(推荐用EDTA抗凝采血管，不可用肝素抗凝管)

样品运输及保存

样品置于1.5mL管中，封口膜封好，干冰运输。细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；血液样品应使用EDTA抗凝，不可用肝素；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。