• 全转录组测序技术

     

     

     

    技术简介:

     

    转录组的研究对象为特定组织或细胞在某一功能状态下所能转录出来的RNA的总和,主要包括信使RNA(messenger RNA,mRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)和环状RNA(circRNA)等长链RNA。

    根据中心法则,基因作为遗传信息的载体,转录成mRNA,并翻译成蛋白质。mRNA的表达调控与各种生物过程相关,从发育、分化,到癌症、衰老。LncRNA、circRNA等非编码RNA分子是发育、增殖、转录、转录后修饰、凋亡、细胞代谢等多种生物过程的重要调控因子,它们通过RNA分子之间相互作用调控基因表达。如LncRNA作为miRNA海绵、顺式调控临近基因表达、与蛋白结合发挥作用等;circRNA作为miRNA海绵、RNA结合蛋白、mRNA“磁铁”指导蛋白质翻译等。

    常规的转录组分析仅通过Oligo(dT)法对mRNA进行富集和分析,会导致包括circRNA和相当比例的LncRNA丢失,无法准确,反映真实的转录组信息。云序生物全转录组测序服务采用样品预处理和建库方案,能够实现一次测序获取三种RNA分子信息(mRNA、LncRNA、circRNA),进而针对不同类型的RNA进行表达分析,结构研究,变异研究以及全新转录本的发现。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    全转录组测序实验流程图 

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  • 云序用户案例

     

    案例1:环状RNA hsa_circ_0004872通过miR-224/Smad4/ADAR1调控回路抑制胃癌发展进程

    原文:Circular RNA hsa_circ_0004872 inhibits gastric cancer progression via the miR-224/Smad4/ADAR1 successive regulatory circuit

    发表时间:2020年11月10日

    发表期刊:Molecular Cancer

    影响因子:33.9

    发表单位:山东大学基础医学院

     

    胃癌(GC)是一种常见的消化系统恶性肿瘤,其死亡率居全球癌症死亡率第三位。环状RNA(circRNAs)是将线性RNA分子的5’端和3’端以共价键相连而形成的共价闭合的环形结构,其在组织细胞中表达丰富,且表达水平具有稳定性、保守性及时空特异性等特性,这些特性使其在肿瘤诊断方面具有独特优势。

    云序用户山东大学基础医学院贾继辉教授团队利用全转录组测序,确定hsa_circ_0004872的来源、结构组成以及组织表达水平,发现hsa_circ_0004872在胃癌组织中表达下调,与相应的线性RNA相比具有更高的稳定性,过表达hsa_circ_0004872能显著抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    图1 通过全转录组测序鉴定胃癌发生关键circRNA hsa_circ_0004872

     

     

    案例2:CD40×HER2双特异性抗体克服HER2阳性胃癌CCL2诱导的曲妥珠单抗耐药性

    原文:CD40×HER2 bispecific antibody overcomes the CCL2-induced trastuzumab resistance in HER2-positive gastric cancer

    发表时间:2022年7月15日

    发表期刊:Journal for ImmunoTherapy of Cancer

    影响因子:10.6

    发表单位:天津医科大学总医院

     

    胃癌(GC)是一种复杂且异质性的疾病,由各种遗传、环境和宿主因素引起。近年来,包括下一代测序检测在内的高通量技术在识别强大的诊断、预后和治疗生物标志物以及发现GC分子亚型方面取得了重大进展。然而,只有少数生物标志物被转化为临床试验阶段,并且较少的分子靶向药物显着改善了GC患者的预后。

    云序用户天津医科大学总医院付蔚华教授课题组通过全转录组测序,分析了HER2阴性和HER2阳性GC组织中的RNA表达谱,揭示了细胞因子-细胞因子受体相互作用途径,确定了关键基因CCL2,随后进一步研究发现HER2阳性GC中CCL2表达水平与TAM的浸润、浸润的TAM的极化状态、曲妥珠单抗耐药性和GC患者的生存结果相关。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    图2 通过全转录组测序确定胃癌发生的关键基因CCL2

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    云序优势:

    UMI + Spike-in实现“真”绝对定量:

    UMI通过对原始分子进行唯一标记,消除了PCR扩增偏好性,实现对原始分子的准确计数。Spike-in通过提供已知绝对量的外参,校正了样本间技术流程的效率差异。云序生物采用UMI + Spike-in结合应用,实现全转录组测序中基因表达的绝对定量结果,极大地提高了数据的准确性、可比性和生物学意义。

    链特异性检测:

    很多基因位点会生成转录方向相反的、具有重要调控功能的反义RNA。常规的建库方法无法区分这些反义RNA,而云序生物采用链特异性的建库方法,可以准确检测反义RNA,从而提供更全面的转录组信息。

    适用于降解样品:

    云序生物采用特有的,可适用于降解样品的试剂盒,能够极大程度的保留降解样品中的RNA信息。尤其适合于临床样品的转录组检测。

    一站式服务:

    客户只需提供细胞,组织,体液或总RNA,云序生物为您完成从样品准备,文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。

    生物信息分析:

    云序生物具有专业的生物信息学团队,能够满足客户的各类深入数据分析要求。

     

    数据分析(仅供展示  详见demo报告)

    1.mRNA/LncRNA/circRNA的差异表达分析

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    2.对差异表达mRNA、差异表达LncRNA临近基因以及差异表达circRNA来源基因的GO和KEGG分析

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    3.circRNA-miRNA-mRNA共表达网络(高级分析※)

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    4.LncRNA-miRNA-mRNA关联分析(高级分析※)

     

  • 样本要求:

    样品类型:

    血清、血浆、细胞、组织、总RNA、其他类型请电询。

    样品量:

    a) 细胞:> 2×10^6

    b) 组织:> 50 mg

    c) RNA:总量 > 2 µg,浓度 > 50 ng/µL

    样品运输与保存:

    样品运输:样品置于1.5 mL管或冻存管中,封口膜封好,干冰运输。

    样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮速冻后-80℃保存;RNA样品可溶于RNA-free的无菌水中,-80℃保存,避免反复冻融。

技术服务

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