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  • ac4C RNA修饰测序(acRIP-Seq)技术

     

     

    技术简介:

     

    ac4C RNA乙酰化是在RNA ac4C修饰酶的作用下,使N4位乙酰胞嘧啶发生乙酰化的一种保守的化学修饰(N4-acetylcytidine)。早期研究发现该修饰存在于真核生物中丝氨酸及亮氨酸tRNA和18S rRNA上,导致Watson-Crick碱基配合鸟苷的热稳定性增加,调控蛋白合成中的编码准确性;近期研究发现ac4C广泛分布在人类转录组中,大多数位点出现在编码序列(CDS)内,并且通过改善的mRNA稳定性和翻译促进靶基因表达。目前,ac4C RNA乙酰化修饰作为一类新型RNA修饰,是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点和“超级潜力股”!

    与MeRIP-seq类似,acRIP-seq是针对ac4C RNA乙酰化修饰的免疫沉淀与高通量测序结合的技术,是在全基因组规模上检测RNA乙酰化修饰并研究其作用机制的一种高效且经济的方法。技术原理如下: 将乙酰化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA片段进行共孵育,抓取有乙酰化修饰的片段进行测序;同时需要平行测序一个对照(Input)样本,对照样本只含有打断的RNA片段,并不添加RNA乙酰化特异性抗体与其共孵育。对照样本用于消除非特异性抓取的乙酰化片段的背景。对比免疫共沉淀(IP)样本和对照样本(Input)中的序列片段,将RNA乙酰化修饰位点定位到转录组上,并根据RNA-seq数据,计算样本中RNA乙酰化程度及对RNA表达水平的影响。

     

    ac4c acRIP-Seq 产品列表:

     

     

     

               

     

     

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  • 案例分析

     

    案例1:mRNA中胞嘧啶核苷乙酰化促进其翻译效率

     

    原文:Acetylation of Cytidine in mRNA Promotes Translation Efficiency

     

    期刊:Cell                        影响因子:64.5

     

    美国国家癌症研究所(NCI)和弗雷德里克国家实验室,发现下调NAT10(RNA去乙酰化酶)能够抑制Hela细胞的行为;并且ac4C是由NTA10催化的mRNA修饰,下调NAT10后,ac4C的总体水平下降;为了进一步探究ac4C的功能,作者对WT和下调NAT10的Hela细胞进行acRIP-seq和mRNA测序,发现ac4C 的peak主要富集在mRNA的CDS区,同时下调NAT10能够降低ac4C在mRNA中的定点表达,并与靶mRNA的下调有很大关系;作者又进一步发现ac4C乙酰化修饰能够通过延长mRNA的半衰期并促进mRNA的稳定性,同时也能够通过ac4C peak中的密码子偏好性表达,决定并影响mRNA的解码效率,促进底物翻译。这些发现不仅扩大了mRNA修饰范围(包括乙酰化残基),也确立了ac4C在mRNA翻译调控中的作用。

    图注:ac4C的结构及Ac4C peakmRNA中的特征分布情况

     

    图注:ac4C延长mRNA的半衰期,提高其稳定性

     

     

    图注:ac4C促进mRNA的翻译效率

     

  • 云序技术优势:

     

    一站式服务:

     

    客户只需提供组织、细胞、全血样品或RNA,云序生物为您完成m5C BS-Seq全套实验服务。

     

    抗体富集效率高:

     

    acRIP-seq的富集效率是决定数据质量的关键,云序生物acRIP-seq实验采用预验证的商业化试剂盒和精心优化的实验流程,具有极高的效率和特异性。

     

    严格的质控:

     

    云序生物对acRIP-seq实验每一步骤均设有关键质控,全程监控实验质量,保证客户得到优质数据。


    专业的生物信息学分析:

     

    云序生物拥有专业的生物信息分析团队,帮助客户进行实验数据的全面挖掘。

     

    RNA乙酰化测序与转录组联合应用:

     

    可整合RNA乙酰化数据和转录组数据进行生物信息学关联分析,揭示RNA乙酰化对基因表达调控的影响,深入挖掘RNA乙酰化的功能。

     

     

    数据分析(下列有※表示个性化分析)

    1.差异乙酰化区的GO分析与KEGG信号通路分析

     

     

    2.RNA乙酰化位点Motif分析peak韦恩图

     

    3.差异RNA乙酰化聚类图、火山图、散点图

     

    4.乙酰化富集峰在基因上的分布

     

    5.染色体差异基因数统计

     

    6.修饰峰染色体分布图

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