Smile cfRNA-seq

（Spike-in, Molecular ID, Indexing for Level Evaluation）

cfRNA真·绝对定量，为Biomarker筛选而生，一次检测10种cfRNA分子

 

 

 

一、产品概述：

 

 cfRNA：液体活检的多维信息载体

cfRNA（Cell-free RNA）是位于细胞外的游离RNA分子，由多种类型的RNA构成。cfRNA作为“液体活检”的重要组成部分，与cfDNA（细胞游离DNA）共同构成了“液体活检”技术的核心分析物。通过抽血等简单方式获取体液样本，即可无创地反映全身组织的生理和病理状态，已成为各种疾病当中极有前途的生物标志物，包括癌症、多种传染病、心血管疾病和神经系统疾病等等。

然而cfRNA在血液中含量极低、碎片化严重、且极易降解，对检测技术的灵敏度要求极高。云序生物推出Smile cfRNA真·绝对定量测序——一款专为Biomarker筛选而生的真绝对定量产品，该产品以“S-M-I-L-E”五重技术架构，重塑cfRNA绝对定量标准。

一次检测，覆盖10种cfRNA分子——Smile cfRNA-seq采用单文库全转录组建库策略，一次测序即可同时精准定量mRNA、lncRNA、miRNA、piRNA、tsRNA、yRNA、snRNA、snoRNA、rsRNA、srp_RNA 10类cfRNA分子。

 

为什么需要“真”绝对定量？

市面上部分产品宣称“绝对定量”，实则仅依赖UMI分子标签去除PCR重复，只能消除扩增阶段的偏好性，却无法校正RNA提取损失、逆转录效率差异、样本间操作误差等上游偏差——此为 “伪”绝对定量，其本质仍是相对定量。

云序“真”绝对定量，以 UMI + Spike-in + UDI 三重技术协同，贯穿“提取-逆转录-建库-测序”全流程：

✅️ Spike-in，在逆转录之前精准加入每份样品，作为“随行标尺”全程监控并校正RNA提取后的所有物理损失与酶促效率差异，确保跨样本间的数据站在同一基准线上；

✅️ UMI，在扩增前为每一个原始cDNA分子打上独有标签，从源头清除PCR扩增与测序仪带来的重复冗余，确保“数一个原始分子，只算一次”；

✅️ UDI，为多样本混合测序提供双端校验的“零串扰”保障，确保每一条测序读段准确无误地回归其原始样本。

 

💡 真 vs 伪绝对定量对比

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

💡 S-M-I-L-E 五重技术架构

云序生物 Smile cfRNA-seq 以“S-M-I-L-E”五重技术架构，重塑 cfRNA 绝对定量标准：

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

二、cfRNA临床应用场景

cfRNA 作为“液体活检”的重要组成部分，在多个疾病领域展现出巨大潜力：

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

💡 cfRNA功能与生物学意义

细胞间通讯：被包裹在外泌体中的 cfRNA 可被受体细胞吸收，调节受体细胞的生物学功能，成为远距离细胞间信息传递机制。

基因表达调控：尤其是 miRNA、tsRNA 等 sncRNA，即便在体液中流动，被其他细胞摄取后仍能发挥基因沉默等调控功能。

分子足迹：cfRNA 的组成和数量为我们提供了体内细胞活动的实时快照，生理过程与病理状态都会在体液中留下独特的 cfRNA 特征谱。

 

 

三、实验原理

云序生物cfRNA的检测基本包括四步：体液分离、RNA提取、文库构建及测序、生物信息分析。

1. 体液分离

通过精细的离心操作，从全血中分离出不含细胞成分的血浆，最大化获取真正的循环游离 RNA，并最大限度地减少血细胞残留 RNA 的污染。对于尿液、脑脊液等样本，云序拥有相应优化流程。

2. RNA提取

cfRNA含量极低且高度碎片化，云序使用商业化的游离RNA纯化试剂盒来高效提取并富集这些微小的RNA分子，同时去除蛋白质、盐离子等杂质。

3. 文库构建与测序

依据研究目标（涵盖 mRNA、lncRNA、miRNA、piRNA、tsRNA、yRNA、snRNA、snoRNA、rsRNA、srp_RNA全转录组 RNA 种类），Smile cfRNA-seq 采用“单文库10种分子兼容建库”策略，通过优化接头连接与逆转录条件，在同一反应体系中同时捕获长链（>200 nt）与短链（≤200 nt）RNA 分子，实现从长链 mRNA、lncRNA到小分子 miRNA、piRNA、tsRNA、yRNA、snRNA、snoRNA、rsRNA、srp_RNA 的无偏覆盖。

建库过程中，引入 UDI（双端唯一索引）接头确保样本间数据互不串扰；同时为每个原始 RNA 分子添加 UMI（分子条形码）用于 PCR 扩增偏好的精确校正；并加入已知浓度的 Spike-in 作为外部参照，用于构建绝对定量标准曲线。通过高通量测序平台进行深度测序，确保低丰度分子的有效检出。

4.生物信息分析

云序生物对原始测序数据进行严格的质量控制、序列比对、定量和统计分析，最终精准鉴定具有统计显著性和生物学意义的RNA。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

cfRNA测序实验流程示意图

 

云序优势

真绝对定量：UDI + UMI + Spike-in三重协同

UDI（双端唯一索引）：从源头多样本混合测序时的数据串扰，确保每个读段归属无误；

UMI（分子条形码）：有效消除 PCR 扩增偏好和建库噪声，实现对原始分子的准确计数；

Spike-in（外源内参）：建立绝对定量标准曲线，使跨样本、跨批次数据具备真正的绝对值可比性。 三者协同作用，彻底解决传统相对定量方法的偏差问题，让您的差异分析结果更加可靠，并为疾病标志物筛选与转化研究提供坚实数据底座。

cfRNA全转录组捕获：

云序生物采用创新的单文库全转录组兼容建库方案，在同一反应体系中一次性覆盖mRNA、lncRNA、miRNA、piRNA、tsRNA、yRNA、snRNA、snoRNA、rsRNA、srp_RNA共10种RNA分子，无需分库建库，避免了样本分割损耗和批次差异，确保对每一种目标cfRNA实现同步、高效、无偏的精准检测。

一站式服务：

云序生物提供从样本到分析的全流程服务，客户仅需提供体液或总RNA样本，即可完成样品准备、文库构建、上机测序及数据分析全部环节。依托专业的生物信息学团队，我们能够满足各类高级和定制化的数据分析需求，助力客户高效推进研究进程。

 

 

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