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m7G RNA甲基化测序
m7G全转录组测序

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技术简介
m7G RNA甲基化是在甲基化转移酶的作用下,使RNA鸟嘌呤(G)的第七位N上加上甲基的一种修饰(N7-methyladenosine,m7G)。研究表明,m7G RNA甲基化修饰存在于各类分子中,包括:mRNA 5’帽子结构、mRNA内部、pri-miRNA、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA(rRNA)。m7G RNA甲基化修饰能够调节mRNA的转录、miRNA的生物合成和生物学功能、tRNA稳定性、18S rRNA的核内加工及成熟。m7G RNA甲基化修饰作为一类新型RNA甲基化,近两年高分文章不断,是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点。
云序生物提供两种m7G RNA甲基化测序服务:(1)m7G RNA甲基化单碱基测序,可对m7G修饰进行高通量检测和单碱基定位;(2)MeRIP测序,可通过m7G特异性抗体,抓取有甲基化修饰的片段进行测序,对m7G修饰进行高通量测序和peak峰定位。此外,云序生物针对m7G RNA甲基化开发了多款产品,可实现对mRNA、LncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多类RNA分子的m7G甲基化修饰水平的全面检测。

云序优势 
单碱基分辨

m7G RNA甲基化单碱基测序方式,可对m7G甲基化修饰进行单碱基定位。

抗体富集效率高
m7G MeRIP测序方式,采用预验证的商业化抗体和精心优化的实验流程,具有极高的效率和特异性。

高通量检测
可对全转录组范围内的m7G位点进行高通量地平行检测。
全分子覆盖
可全面地对环状RNA、mRNA、lncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多类RNA分子的m7G位点进行检测。
一站式服务
客户仅需提供组织或细胞,云序生物一站式完成RNA抽提,样品预处理,建库,测序,数据分析全套流程。
专业的生物信息学分析
专业的生物信息学团队,能够满足客户的各类深入数据分析需求

案例分析
案例1:哺乳动物mRNA内m7G甲基化转录组图谱
原文:Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA 
期刊:Molecular Cell 影响因子:14.25 
由于全部种类的反转录酶均无法将RNA m7G位点逆转录成对应发生碱基突变的cDNA,为了准确的探究RNA内m7G甲基化情况,何川团队利用m7G自带正电荷的特征,开发了新的m7G单碱基深度测序方法。该方法能够将RNA内含m7G位点转化为另一种可产生反转录碱基变异的新位点,并依据碱基变异率估计m7G位点的甲基化水平。此方法随后也被证实可检测18S rRNA中的1639位内含m7G位点以及可揭示人类细胞tRNA中的22个46位内含m7G位点。并观测到其在mRNA分布、富集的共有序列及其它统计特征与m7G-MeRIP-seq数据基本保持一致。该文章不仅揭示了m7G甲基化在人类细胞中的分布特征,同时还发现METTL1是一种甲基转移酶,它在mRNA中催化了m7G甲基化修饰,并表明m7G的内部甲基化可以影响mRNA的翻译。


(A) Hela和HepG2细胞进行m7G单碱基深度测序:10个代表性的mRNA内m7G修饰结果展示。(C) 801个m7G位点的mRNA特征。(E)前7个mRNA内 m7G motif在mRNA中的分布百分比。

案例2:METTL1通过m7G甲基化促进let-7 MicroRNA的加工
原文:METTL1 Promotes let-7 MicroRNA Processing via m7G Methylation
期刊:Molecular Cell 影响因子:14.25 
剑桥大学戈登研究所和病理学系中心,借助m7G RNA甲基化测序技术,识别了A549细胞中miRNA具有m7G甲基化修饰。该研究发现Mettl1调控的pri-let7 m7G修饰通过改变pri-let7中G-四重结构,进一步调控pre-let7和let7的表达,影响肺癌细胞迁移。该研究揭示了Mettl1依赖的m7G甲基化修饰可以作为调控miRNA结构、生物发生和细胞迁移的一种新的RNA修饰。
图注:m7G在miRNA生物发生中的作用
样本要求
样品类型 
细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 
测序样品量
1.单碱基测序方式:
    a) 细胞:≥1×108 
    b) 组织:500 mg - 5 g 
    c) RNA:100 μg - 300 μg 
2. MeRIP测序方式:
    a) 细胞:≥2×107
    b) 组织:100mg - 1g
    c) RNA:30 μg - 300 μg 
    d) 超微量满足500 ng - 30 μg
样品运输及保存
样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 
样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。

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