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蛋白组学
Label free蛋白质谱

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技术简介

蛋白质组相对定量分析

蛋白质非标记定量技术(label-free)通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,它克服了传统的同位素标记的缺点,即过高的样品浓度, 复杂的实验方案及价格过高的原料等,该方法具有速度更快,更简洁及更简明的结果等优点。蛋白质非标记定量技术(label-free)只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。 

实验流程

云序优势

检测通量高:

一次性的对样品中的全部蛋白进行相对定量分析。

结果准确:

利用高分辨率的质谱法检测,相对二维电泳等传统方法而言更加准确,快捷。

无需标记:

克服标记样本的局限性,可研究大规模样本。

样品需求量少:

每run可检测多达20种蛋白。

性价比高:

无需使用昂贵的标记实际,实验性价比高。

样本要求

1)富含杂质或蛋白含量低的样本,如植物的根茎、木质部、韧皮部组织等:干重≥5g

2)植物类样本送样量同样适合于蕈类真菌,如蘑菇、木耳:湿重≥1g。

3)细胞样本如需进行磷酸化位点富集鉴定,细胞数目须达到:107,约细胞沉淀体积100µl。

4)由于解冻后血细胞易破裂,细胞内蛋白溶出来会影响分析结果,因此建议不要直接送全血样本。

5)血液类样本:如果直接送提取蛋白,需先去除高丰度蛋白。

6)尿液样本:送样前1000rpm离心5min,弃去沉淀。

7)如果是其他特殊样本,或对样本要求有疑问,请联系我们。

数据分析

数据产出统计

蛋白质鉴定结果

蛋白质定量结果

蛋白质GO分析

蛋白质COG分析

蛋白质Pathway代谢通路分析

差异蛋白GO富集分析

差异蛋白的Pathway富集分析

重复性分析(仅针对有重复设计的项目)

多样品间表达模式聚类(适用于样本数≥3的项目)

案例解析

案例1:研究小鼠体外胚胎移植引起长期效应的潜在原因

研究内容:

以体内受精(IVO)与体外受精(IVP)发育形成的胚胎为对象,比较其蛋白质组差异,集中研究体外受精对后代产生长期效应的潜在原因,为研究辅助生殖技术(ART)产生的后代发生多重畸变的分子起源和潜在机制提供参考。

研究路线:

样本:分别取IVO 7.5,IVO10.5,IPV 7.5,IPV10.5时的小鼠胚胎。

技术:label-free质谱,3次技术重复。

研究结果:

IVO7.5/IPV7.5组、 IVO10.5/IPV10.5组的差异蛋白分别为300和262个。 差异蛋白与转录后、翻译和翻译后调控功能相关,并且在mRNA和蛋白层面表达相关性较好。部分差异蛋白参与能量和氨基酸代谢以及神经核感官发育的过程,可以作为研究ART诱导子宫发育迟缓和神经发育异常机制的候选靶标。差异蛋白在神经退行性疾病通路上显著富集,提示通过ART产生的后代对其易感性可能会增加。






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